【考马斯亮蓝测定蛋白质含量】考马斯亮蓝法是一种常用的蛋白质定量方法，因其操作简便、灵敏度高且成本较低，在生物化学实验中广泛应用。该方法利用考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合后发生颜色变化的特性，通过比色法测定蛋白质浓度。
一、原理总结
考马斯亮蓝G-250在酸性条件下与蛋白质结合，形成蓝色复合物，其最大吸收波长为595 nm。随着蛋白质浓度的增加，溶液的颜色由棕红色变为蓝色，吸光度随之升高。通过与已知浓度的标准蛋白溶液比较，可计算出待测样品中的蛋白质含量。
该方法适用于大多数常见的蛋白质，但对某些含有高浓度盐类或去垢剂的样品可能产生干扰，需进行适当预处理。
二、实验步骤（简要）
| 步骤 | 内容 |
| 1 | 准备标准蛋白溶液（如牛血清白蛋白） |
| 2 | 配制考马斯亮蓝试剂 |
| 3 | 取不同体积的标准蛋白溶液，加入试剂混匀 |
| 4 | 在595 nm波长下测定吸光度 |
| 5 | 绘制标准曲线，根据样品吸光度计算浓度 |
三、优缺点对比
| 项目 | 优点 | 缺点 |
| 操作简便 | 实验步骤少，易于掌握 | 对某些成分敏感，易受干扰 |
| 灵敏度高 | 可检测低至10 µg/mL的蛋白质 | 不适合高浓度样品 |
| 成本低 | 试剂价格低廉 | 不能用于所有类型的蛋白质 |
| 快速 | 实验时间短 | 需要标准品，结果依赖标准曲线 |
四、注意事项
- 使用前应确保试剂新鲜，避免污染。
- 样品中若含有强碱、强酸或高浓度盐类，需先进行稀释或透析处理。
- 实验过程中应避免光照，防止染料分解。
- 每次实验应同时做空白对照和标准曲线。
五、应用范围
考马斯亮蓝法广泛应用于蛋白质纯化、酶活性测定、细胞裂解液分析等实验中，是实验室中最常用的蛋白质定量方法之一。
总结：
考马斯亮蓝法以其简单、快速、经济的特点，成为蛋白质含量测定的重要手段。尽管存在一定的局限性，但在合理操作和适当预处理的前提下，仍能获得较为准确的结果。